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基因操作工具

GENE MANIPULATION TOOLS

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质粒构建

  科研服务平台可为基因功能研究者提供前沿、全面、严谨的载体设计和载体构建服务,内容涵盖普通真核表达载体、病毒载体等。

  病毒载体构建服务包含慢病毒、腺相关病毒、腺病毒和逆转录病毒载体等,构建内容包括基因过表达载体构建、基因定点突变表达载体构建、用于基因沉默的shRNA设计与构建、microRNA表达与封闭载体设计与构建、萤光素酶报告基因载体构建(UTR、启动子及其它功能序列)以及Cre-LoxP系统和CRISPR/Cas9基因编辑工具载体设计与构建等,力求一站式解决基因功能研究中的基因上调和基因下调需求。

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质粒优势:

  ①表达时间快,导入细胞后约24小时可观察到目的基因表达;

  ②构建技术简单,成本低。

  ③和元的过表达载体库丰富,并且过表达的标记丰富

  荧光标记:GFP、mCherry、CFP、BFP、EYFP、mNeonGreen、tdTomato、 mScarlet…

  标签标记: FLAG、 HA 、Myc、His tag…

  抗性标记:Puro、Neo、Hygro、BSD…

  局限性:

  ①转染试剂具有细胞毒性,使用后影响细胞状态;

  ②大部分细胞较难转染,达不到基因操作目的;

  ③质粒不整合到细胞基因组,只能进行短时间的瞬时表达,无法进行观察周期较长的实验。

  由于单纯质粒存在一定的局限性,根据实验需要需包成病毒进一步满足不同实验的需求。


  不同表达载体的区别

表达系统真核表达载体慢病毒载体重组腺相关病毒载体重组腺病毒载体
载体基因特性双链DNA质粒RNA逆转录病毒单链DNA病毒双链DNA病毒
外源基因表达时间24h开始表达,持续3-7天2-4天开始表达,长时间稳定表达7-14天开始表达1-2天开始表达
插入片段大小8kb左右4kb左右2.8kb左右6kb左右
稳定细胞株筛选难操作可以不可以不可以,瞬时表达
细胞实验细胞系,部分转染效率低首选,广谱,感染效率高不适合广谱,感染效率高
动物实验不适合适合,根据观察时间和注射部位首选,根据观察时间和注射部位免疫原性高,慎选
滴度范围108~109TU/ml1012-1013vg/ml1010-1011pfu/ml


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