1. 血清型  8  9

2. 启动子选择

广谱型启动子CMV；AAT(Shen,et al.1989.& Hafenrichter,et al.1994&Xia,et al.2020)、TBG（Yan,et al.2012&Wang,et al.2011）

3. 注射方式

定点注射-肝脏直接递送，转导效率高，但具有高侵入性、操作复杂、有凝血缺陷的动物具有术后并发症风险。

外周载体递送，虽然侵入性小，操作简单，但病毒用量较大

肝门静脉注射

1）. 肝门静脉注射

（1）通过腹腔注射麻醉剂将成年小鼠麻醉，对小鼠腹部局部区域做去毛及消毒处理；

（2）在距剑突软骨下方2-3mm处，做一个2-3cm的中线切口。

（3）暴露门静脉，使用30G针头在1min内均匀缓慢注射1*10的11次方病毒悬液。

注：门静脉是一种相对较大的静脉，提起肝前叶一般即可看到门静脉。在手术过程中，用浸泡在生理盐水中的无菌纱布覆盖肠道，保持肠道湿润。

（4）注射后保持针位约10-20秒。取出针后，做好防出血处理；

（5）缝合腹部，将小鼠放置于加热灯下，直至恢复意识。然后将其放回笼子单独饲养，直到伤口完全愈合。

2）. 肝内注射

（1）通过腹腔注射麻醉剂将成年小鼠麻醉，对小鼠腹部局部区域做去毛及消毒处理；

（2）在距剑突软骨下方2-3mm，做一个2-3cm的中线切口，以露出肝脏。

（3）用固定在结核菌素注射器上的30G针头将病毒悬液缓慢注入肝实质中。

注:在注射过程中通过手术立体镜监测注射部位，确保无出血或外渗。如果出现上述任何一种情况，需取出针头，轻轻按压止血，然后选择一个新的部位进行注射。

（4）取出针，用无菌纱布轻轻按压止血。

（5）再选择其他部位进行注射。

（6）缝合腹部，将小鼠放置于加热灯下，直至恢复意识。然后将其放回笼子单独饲养，直到伤口完全愈合。

3）. 尾静脉注射

（1）将小鼠放在标准限制器中，使注射器能够完全接触到整个尾巴长度。

（2）将一根30G的针头固定在1cc结核菌素注射器上，尽可能远的插入尾部侧面静脉。选择一个远端部位，如果第一次注射失败，可以选择另一个更近端的注射部位。

注：a：小鼠尾巴上较容易接触到的静脉位于尾巴的侧面，且侧静脉非常浅，无需进针很深；小鼠尾部背面的静脉很难常规注射；尾部腹面的血管是动脉，不可注射。b：注射前用温水轻轻地加热尾巴，可以使血管得到一定程度的舒张，便于注射。

（3）针头到位后，缓慢注射病毒悬液。注: 如果注射器由于压力增加而难以压下柱塞，此时很可能针头不在静脉中。在这种情况下，应取下针头并选择一个新的位置重新注射。

（4）注射完成后取下针头，轻轻按压止血，然后立即将小鼠放回笼中。注：使用此方法注射成年小鼠，病毒用量控制在150μl较佳。

4. 总结

在应用AAV进行肝脏研究时，可以选择靶向性更强的肝门静脉注射或肝实质内注射的方式，如果实验技能受限或考虑到尽量减少侵入性的损伤，也可以选择尾静脉注射等实验技能要求稍低的给药策略，在这种情况下，就可以配合AAV8等肝脏嗜性较强的血清型以及TBG等肝脏特异性启动子来提高AAV对肝脏的感染效率，以达到理想的实验效果。