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G418使用说明

1. 产品信息

产品名称:G418(Geneticin,遗传霉素)

货 号:REVG1003

存储浓度:100 mg/ml in ddH2O

产品规格:100 µl/支

化 学 式:C20H40N4O10.2H2SO4

分 子 量:692.71


2. 运输和存储条件

本产品在 4℃下快递寄送。请保存在-20℃,避免反复冻融,有效期 1 年。


3. 产品介绍

G418,遗传霉素,是一种氨基糖苷类抗生素,它通过影响 80S 核糖体功能而阻断蛋白质合成,在分子遗传试验中常被用作抗性筛选。它通过抑制转座子 Tn601,Tn5 的基因对原核和真核等细胞产生毒素,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞,也包括原生动物和蠕虫。当 neo 基因被整合进真核细胞 DNA 后,则能启动 neo 基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418 的选择性培养基中生长。G418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。


4. 产品使用

在使用 G418 筛选抗性细胞之前,必须先确定抗生素在目的细胞中的最佳使用浓度。

操作方法:将细胞稀释到 1000 个/ml,在 100 μg/ml~1000 μg/ml 的 G418 浓度范围内进行筛选,选择出在 10~14 天内使细胞全部死亡的最低 G418 浓度来进行下一步的筛选试验。

1) 细胞转染含 neo 基因的质粒,或感染含 neo 基因的慢病毒。24h(转染)或 48h(慢病毒感染)后,细胞继续培养于含一定浓度 G418 的培养基中(注意细胞不要太密,最好细胞密度不超过 25%);

2) 每 3-4 天换液,更换新的含 G418 的培养基;

3) 挑单克隆细胞到 35 mm 培养皿中,继续于含 G418 的培养基扩大培养;

4) 扩大培养的带抗性的细胞可用于后续验证和细胞功能学实验。


5. 注意事项

本产品仅用于研究和实验室用途,不适用于药物,家庭或其他用途。

请避免直接与皮肤接触,操作后请及时清洗双手。

 


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