Cell Counting Kit-8（简称 CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有 WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4- 二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，它在电子载体 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。用酶标仪在 450nm 波长处测定其吸收值，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。MTT现在较为少用。

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用目的基因shRNA慢病毒感染Hep3B细胞，3天后收集细胞，按1500/孔的细胞数量接种细胞至96孔板，第二天待细胞贴壁后，开始进行CCK8检测，连续检测5天，获得细胞增殖曲线。结果显示，shRNA下调目的基因表达后，细胞增殖显著减缓，表明目的基因与Hep3B细胞增殖显著相关。

克隆形成

细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

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用目的基因shRNA慢病毒感染Hep3B细胞，3天后收集细胞，按1000/孔的细胞数量接种细胞至6孔板，进行细胞克隆实验，shRNA下调目的基因表达后，细胞克隆能力减弱，表明目的基因与Hep3B细胞克隆能力相关。

Transwell

血清中某些成分，如一些细胞因子，对细胞生长来说是必不可少的，因此细胞对这些因子具有趋向性，利用Transwell小室，将细胞与含血清的培养基隔离，利用细胞的这种趋性来促使细胞迁移。细胞迁移是肿瘤转移的一个重要指标，通过测量细胞的转移能力来衡量肿瘤转移迁移能力。

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用目的基因shRNA慢病毒感染Hep3B细胞，3天后收集细胞，按5000/孔的细胞数量接种细胞至Transwell小室，进行细迁移侵袭实验，shRNA下调目的基因表达后，细胞迁移侵袭能力减弱，表明目的基因与Hep3B细胞迁移侵袭能力相关。

划痕实验

创伤愈合实验是一种简单、廉价的方法，也是最早发展起来的研究定向细胞在体外迁移的方法之一。该方法模拟了细胞在体内愈合过程中的迁移过程。基本步骤包括在细胞单层中创建一个“伤口”，在细胞迁移过程中在开始和定期捕获图像以关闭伤口，以及比较图像以确定细胞迁移速率。

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用目的基因shRNA慢病毒感染Hep3B细胞，3天后收集细胞，按5万/孔的细胞数量接种细胞至24孔板，进行细胞划痕实验，shRNA下调目的基因表达后，细胞划痕愈合能力减弱，表明目的基因与Hep3B细胞迁移能力相关。

细胞凋亡

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为 35~36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的 Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。与 FITC 的绿色荧光信号相比，EGFP 的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用 EGFP 作为荧光标记探针。碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V 与 PI 匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

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